Каталог статей

Главная » Статьи » Ветеринария
Получение ,разбавление и хранение спермы.
Научные основы и технология получения спермы на искусственную вагину
Физиологической основой данного метода является воздействие соответствующими раздражителями на чувствительные нервные окончания пениса. Среди чувствительных нервных окончаний пениса различают:
- генитальные тельца, которые сосредоточены преимущественно в коже головки пениса, имеют вид колбочек, содержащих разветвления нервных волокон, воспринимают холод;
- тельца Мейсснера, расположенные также поверхностно и являющиеся осязательными рецепторами;
- тельца Фатер-Пачини, расположенные в толще ствола пениса, воспринимающие давление.
Эякуляция происходит под влиянием раздражения чувствительных к давлению нервных окончаний (тельца Фатер-Пачини). Наоборот, раздражение антагонистических рецепторов (воспринимающих холод и осязательных) тормозит эякуляцию. Следовательно, при получении спермы от производителей необходимо создавать условия для возбуждения рецепторов, воспринимающих давление, и устранять раздражение тормозных рецепторов (холодовых и осязательных).
Правильно подготовленная искусственная вагина должна иметь температуру в диапазоне 40-42°С, скользкую внутреннюю поверхность, давление 50-60 мм рт.ст. Даже незначительное понижение температуры (на 1-2°С) способно затормозить проявление половых рефлексов.
Методы получения спермы от производителей
Существуют следующие методы получения спермы от производителей:
1. Уретральные (сперму получают из мочеполового ка¬нала самца):
а) использование искусственной вагины;
б) фистульный метод;
в) метод мастурбации (раздражение полового член трени¬
ем о препуциальный мешок);
г) массаж ампул спермиопроводов (у крупных животных);
д) метод элекроэякуляции.
2. Влагалищные (сперму собирают из влагалища самки после осеменения):
а) губочный метод (стерильную губку вводят во влагали¬
ще самки и извлекают после полового акта);
б) влагалищный (собирают сперму из влагалища при по¬
мощи специальных инструментов после полового акта).

Разбавление, хранение и транспортировка спермыЗначение и необходимость разбавления спермы
Во время эякуляции к содержимому эпидидимиса примешиваются секреты придаточных половых желез. Они изменяют рН среды, насыщают плазму электролитами (соли натрия, калия, магния); последние вызывают разрушение липопротеидного покрова спермиев. Отмеченные сдвиги обуславливают переход спермиев из анабиоза в активное состояние; это, в свою очередь, приводит к быстрой их гибели.
Непосредственными причинами сокращения срока жизни спермиев вне организма являются:
- истощение источников энергии в спермальной плазме и самих спермиях;
- интоксикация продуктами жизнедеятельности спермиев;
- разрушение липопротеидного покрова, набухание мем¬бран и снятие электрического заряда;
- отрицательное действие находящихся в сперме и раз¬множающихся в ней микроорганизмов;
- температурные перепады.
Следовательно, для продления срока жизни спермиев во внешней среде требуется:
- уменьшить активность спермиев;
- обеспечить их дополнительными источниками энергии;
- защитить мембраны спермиев от разрушения;
предотвратить накопление токсических продуктов мета¬болизма;

- блокировать размножение находящихся в сперме микро¬организмов;
- повысить устойчивость спермиев к температурным пе¬репадам и криогенным воздействиям.
Это достигается применением специальных разбавителей.
Помимо защитных функций, разбавление спермы облег¬чает дробление эякулята на порции (спермодозы). Это особенно существенно для животных с маточным типом естественного осеменения (свиньи, лошади), поскольку спермодоза наряду с нормативным числом подвижных спермиев должна быть доста¬точно объемной.
Синтетические и биологические среды для хранения спермы
Разбавители могут быть биологическими и синтетически¬ми (искусственными) средами. Из биологических сред использовалось коровье молоко, кокосовое молоко, 7%-ный раствор пчеиного меда, а также томатный сок.
Применяемые в настоящее время разбавители спермы сельскохозяйственных животных относят к синтетическим средам.
Синтетическая среда обычно состоит из трех и более компонентов, например, глюкозоцитратно-желточная среда (ГЦЖ).
Основные компоненты разбавителей и их роль
В состав большинства разбавителей входят следующие компоненты:
- Сахара (глюкоза, лактоза). Служат источником энергии для спермиев. Помимо этого они участвуют в поддержании осмотического давления, понижают электропроводность среды, предохраняют спермии от потерь электрического заряда.
- Цитрат натрия. Создает буферность среды, нейтрализует конечные продукты жизнедеятельности спермиев, связывая ионы кальция и тяжелых металлов.

-Трис-буфер (2-амино-2-гидроксиметил-1, пропандиол). Устойчиво удерживает первоначальную рН среды, обладает ос¬мотическим действием, устраняет явления дыхательного ацидоза в спермиях.
-Трилон Б (хелатон, двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Образуя временные связи с ионами кальция, тормозит активность протеаз, АТФаз и других ферментов, участвующих в метаболических процессах в спермиях.
-ЭДТА (тринатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Подобно трилону Б, образует хелатные комплексы с ионами кальция, тем самым блокирует активность ферментных систем спермиев.
- Сульфат аммония. Предохраняет от разрушения сульф гидрильные группы в мембранах спермиев, задерживает выход электролитов в окружающую среду.
-Глицерин. Обладает криопротекторными свойствами, легко проникает внутрь спермия, понижает температуру замерзания и препятствует образованию кристаллов связанной воды, что позволяет избежать повреждений клеточных структур. Благодаря высокой гидрофильности препятствует дегидратации цитоплазмы.
Желток куриных яиц. Содержит лецитин и липопротеины, которые создают на поверхности спермия адсорбционный слой, предохраняющий его от холодового шока.
Спермосан ППК. Комплексный антибактериальный препарат, состоящий из пенициллина, полимиксина, канамицина. Такая комбинация эффективно тормозит размножение микроорганизмов в сперме.
В состав некоторых разбавителей входят антиоксиданты (токоферол), загустители (гуммиарабик), свободные аминокислоты (гликокол, аргинин) и другие компоненты.

Замораживание и хранение спермы при температуре -196°С в жидком азоте
Для замораживания пригодна сперма быка с активностью спермиев не ниже 8 баллов и концентрацией их не менее 0,8 млрд в 1 мл.
Замораживают сперму быков в гранулах (0,1-0,2 мл). Эта расфасовка обеспечивает более эффективное использование со¬судов Дьюара для хранения спермы, несколько лучшую выживаемость и оплодотворяющую способность спермиев. После оценки сперму разбавляют средой № 1 (11%-ный раствор лактозы – 63 мл, желтка – 30 мл, глицерина – 7 мл) в соотношении 1:1, затем средой № 2 (11%-ный раствор лактозы – 81,5 мл, желтка – 15 мл, глицерина – 3,5 мл), доводят степень разбавления до нужного показателя. Для замораживания спермы грану¬лами по 0,5-1 мл используют среду: вода дистиллированная – 100 мл, лактоза – 11,5 г, желток куриного яйца – 20 мл, глицерин – 5 мл.
После разбавления сперму охлаждают при +2…+5оС в течение 4-7 ч. Затем берут фторопластовую пластину, на которой с двух сторон имеется по 300-324 лунки для накапливания спер¬мы, обеззараживают ее с помощью бактерицидных ламп, опус¬кают в широкогорлый сосуд с жидким азотом и охлаждают до тех пор, пока прекратится кипение азота. Охлажденную пластинку приподнимают над поверхностью жидкого азота и при помощи шприца наносят разбавленную сперму объемом по 0,1 мл в каждую лунку. Спустя 2-3 минут после нанесения спермы в последнюю лунку, пластинку погружают в жидкий азот на 1-2 мин. После этого, вынув пластинку, замороженные гранулы собирают в пластмассовые коробочки с небольшими отверстиями (или в марлевые мешочки) и хранят их в жидком азоте. Главным недостатком замораживания спермы в гранулах является их незащищенность.
Под руководством Ф.И. Осташко разработана Харьковская технология замораживания спермы в облицованных (покрытых тонкой полимерной пленкой) гранулах. Во Франции предпочитают быстро замораживать сперму в пайетах («соломинках»), которые одновременно служат инструментом для осеменения коров. Для замораживания спермы в пайетах по французской технологии (профессор Кассу) используют среды «Лецифос» и «Криоцифос». Расфасовывают сперму в пайеты объемом 0,5 мл.
Для разбавления и замораживания спермы по Байсогальской технологии (Литовская технология) используют среду ЛЦГЖС. Расфасовывают сперму в пайеты объемом 0,25 мл с расчетом, чтобы после оттаивания в дозе спермы содержалось не менее 15 млн подвижных спермиев.
Длительность хранения замороженной спермы в жидком азоте на племпредприятиях осуществляют в специальных помещениях (хранилищах), в которых установлены стационарные емкости ХБ-0,5 или КВ-6202.
Транспортируют сперму и хранят на пунктах искусственного осеменения в сосудах Дьюара различной емкости (от 4 до 50 л жидкого азота).
Азот доставляется на пункты искусственного осеменения в транспортных резервуарах, установленных на автомобилях высокой проходимости.
Категория: Ветеринария | Добавил: chipka2000 (29.07.2013)
Просмотров: 2773 | Рейтинг: 1.0/1
Всего комментариев: 0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
[ Регистрация | Вход ]
Приветствую Вас Гость